結締組織生長因子特異性結合肽的表達及分離純化

目的:利用基因工程技術獲得與結締組織生長因子(CTGF)特異性結合的小肽.方法:設計并合成帶有腸激酶切割位點的基因片段,插入pET-32(a)+質粒載體中硫氧化還原蛋白基因下游,構建重組質粒,轉入E.coli BL21表達菌中,用終濃度1mmol·L-1的IPTG誘導表達融合蛋白;用熱變性和硫酸銨分級沉淀對融合蛋白進行初步純化,然后用親和層析進一步純化,經腸激酶切割,最后用凝膠過濾層析分離獲得目的小肽;用反相色譜對所獲小肽進行純度鑒定.結果:所構建的重組質粒測序結果與預期一致;誘導表達后用SDS-PAGE鑒定,發現在相對分子質量20 000處有濃密的表達條帶出現,與預期一致;融合蛋白用熱變性和硫酸銨分級沉淀進行初步純化,得率分別為78.6%和52.3%;用親和層析純化得率為50.5%;經腸激酶切割后用凝膠過濾層析分離獲得目的小肽,用反相色譜鑒定其純度大于95%;最終每升發酵液獲得3.4mg目的肽.結論:成功制備CTGF特異性結合肽,為進一步研究該小肽的生物學活性打下基礎.

作 者： 王明虹 吳國球 劉乃豐 WANG Ming-hong WU Guo-qiu LIU Nai-feng   作者單位： 王明虹,劉乃豐,WANG Ming-hong,LIU Nai-feng(東南大學,臨床醫學院,江蘇,南京,210009)

吳國球,WU Guo-qiu(東南大學附屬中大醫院,臨床檢驗中心,江蘇,南京,210009) 

刊 名： 東南大學學報（醫學版）  ISTIC 英文刊名： JOURNAL OF SOUTHEAST UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCE EDITION)  年，卷(期)： 2008 27(4)  分類號： Q78  關鍵詞： 結締組織生長因子   分離純化   特異性肽  

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