介導(dǎo)大鼠結(jié)締組織生長因子基因沉默的慢病毒載體轉(zhuǎn)移質(zhì)粒的構(gòu)建及鑒定

目的:構(gòu)建介導(dǎo)大鼠結(jié)締組織生長因子(CTGF)基因沉默的慢病毒載體轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pGCL-CTGF,為進(jìn)一步包裝慢病毒載體奠定基礎(chǔ).方法:以大鼠CTGF基因為靶基因,根據(jù)RNA干擾(RNAi)序列設(shè)計原則,設(shè)計4對有小發(fā)夾結(jié)構(gòu)的RNAi靶點序列,退火形成雙鏈DNA,雙酶切后定向克隆到慢病毒載體轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pGCL-GFP中,構(gòu)建4個含靶基因片段的重組慢病毒載體轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pGCL-CTGF,并對質(zhì)粒進(jìn)行PCR及測序鑒定.結(jié)果:CTGF的短發(fā)夾RNA(shRNA)片段被成功克隆到慢病毒載體轉(zhuǎn)移質(zhì)粒pGCL-GFP中,4個插入序列與設(shè)計的靶基因片段完全一致.結(jié)論:構(gòu)建了能夠表達(dá)4個含CTGF靶基因片段的慢病毒載體轉(zhuǎn)移質(zhì)粒,為進(jìn)一步包裝介導(dǎo)CTGF基因沉默的慢病毒載體奠定了基礎(chǔ).

作 者： 彭梅娟 郝春秋 姜泓 謝玉梅 張巖 李羽 陳隆 白雪帆 PENG Mei-Juan HAO Chun-Qiu JIANG Hong XIE Yu-Mei ZHANG Yan LI Yu CHEN Long BAI Xui-Fan   作者單位： 第四軍醫(yī)大學(xué),唐都醫(yī)院感染病診療中心,陜西,西安,710038  刊 名： 生物技術(shù)通訊  ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY  年，卷(期)： 2008 19(3)  分類號： Q78  關(guān)鍵詞： 結(jié)締組織生長因子   慢病毒載體   轉(zhuǎn)移質(zhì)粒   肝纖維化  

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